NCBI Literature Resources J Am Chem Soc. 2006 Jun 7;128(22):7142-3. doi: 10.1021/ja0604212.
Federica Bogani , Elizabeth McConnell, Lokesh Joshi, Yung Chang, Giovanna Ghirlanda
A designed glycoprotein analogue of Gc-MAF exhibits native-like phagocytic activity
Разработанный гликопротеиновый аналог Gc-MAF проявляет нативную фагоцитарную активность.
Рациональный дизайн белков успешно использовался для создания имитаторов натуральных белков, сохраняющих нативную активность.
В настоящей работе изучается белковая инженерия de novo для разработки мини-белкового аналога Gc-MAF, гликопротеина, участвующего в активации иммунной системы, который показал противораковую активность у мышей.
Gc-MAF получается in vivo из белка, связывающего витамин D (VDBP), путем ферментативной обработки его гликосахарида, в результате чего остается единственный остаток GalNAc, расположенный на открытой петле.
Мы использовали инструменты молекулярного моделирования в сочетании со структурным анализом, чтобы соединить гликозилированную петлю в стабильный трехспиральный пучок (alpha3W, запись PDB 1LQ7).
Полученный модельный пептид из 69 остатков, MM1, был успешно синтезирован методом твердофазного синтеза как в агликозилированной, так и в гликозилированной (GalNAc-MM1) форме. Спектроскопия кругового дихроизма подтвердила ожидаемую альфа-спиральную вторичную структуру.
Термодинамическая стабильность, оцененная по химической и термической денатурации, сравнима с таковой у каркасного белка альфа3W, что указывает на то, что введение экзогенной петли Gc-MAF существенно не нарушало общую структуру. GalNAc-MM1 сохраняет активность природного Gc-MAF по стимуляции макрофагов; тесты in vitro показывают идентичное усиление фагоцитоза, опосредованного Fc-рецептором, в первичных макрофагах.
GalNAc-MM1 обеспечивает основу для разработки мутантов с повышенной активностью, которые можно использовать вместо Gc-MAF в качестве иммуномодулирующего агента в терапии.