1. Фактор активации макрофагов , полученный из белка Gc ( GcMAF ): характер изоэлектрической фокусировки и противоопухолевая активность .

Мохамад, Сахаруддин Бин; Нагасава, Хидеко; Сасаки, Хидеюки; Уто, Ёсихиро; Накагава, Ёсинори; Кавасима, Кен; Хори, Хитоши

01.01.2003

Белок Gc является предшественником фактора активации макрофагов , происходящего из белка Gc ( GcMAF ), с тремя фенотипами: Gc1f, Gc1s и Gc2, в зависимости от его электрофоретической подвижности.

Разница в электрофоретической подвижности обусловлена ​​разницей в составе посттрансляционной сахарной группы. Мы сравнили разницу между белком Gc и электрофоретической подвижностью GcMAF , используя метод изоэлектрического фокусирования (ИЭФ).

Туморицидную активность макрофагов , обработанных GcMAF, оценивали после совместного культивирования с клетками L-929. Механизм туморицида был исследован с использованием биоанализа TNF и высвобождения оксида азота (NO). Обнаружена разница в электрофоретической подвижности белка Gc и GcMAF . Обнаружена туморицидная активность макрофагов , обработанных GcMAF , но не обнаружено высвобождения TNF и NO.

Разница в изоэлектрофокусирующей подвижности белка Gc и GcMAF была бы полезна для разработки метода обнаружения GcMAF . GcMAF повышал туморицидную активность макрофагов , но высвобождение TNF и NO в этом механизме не участвовало.

2. Влияние фактора активации макрофагов , связывающего витамин D (3), на ангиогенез .

Канда, Сигеру; Мотидзуки, Ясуси; Мията, Ясуёси; Канетаке, Хироши; Ямамото, Нобуто

4 сентября 2002 г.

Фактор активации макрофагов ( GcMAF ), связывающий витамин D(3) (Gc-белок), активирует туморицидные макрофаги против различных видов рака без разбора.

Мы исследовали, действует ли GcMAF также как антиангиогенный фактор на эндотелиальные клетки.

Влияние GcMAF на пролиферацию клеток, индуцированную ангиогенным фактором роста

, хемотаксис и образование трубочек исследовали in vitro с использованием культивируемых эндотелиальных клеток (клетки мышиного IBE, клетки PAE свиньи и эндотелиальные клетки пупочной вены человека [HUVEC]) и in vivo с помощью с использованием анализа микрокарманов роговицы мыши.

Для изучения механизма действия GcMAF были использованы блокирующие моноклональные антитела к CD36, рецептору антиангиогенного фактора тромбоспондина-1, который также является возможным рецептором GcMAF . GcMAF ингибировал пролиферацию эндотелиальных клеток, хемотаксис и образование трубочек, которые стимулировались фактором роста фибробластов -2 (FGF-2), фактором роста эндотелия сосудов -A или ангиопоэтином 2. FGF-2-индуцированная неоваскуляризация в роговице мышей также наблюдалась. ингибируется GcMAF .

Моноклональные антитела против мышиного и человеческого рецептора CD36 блокировали антиангиогенное действие GcMAF на стимуляцию ангиогенного фактора хемотаксиса эндотелиальных клеток. Помимо способности активировать туморицидные макрофаги , GcMAF оказывает прямое антиангиогенное действие на эндотелиальные клетки независимо от тканевого происхождения. Антиангиогенные эффекты GcMAF могут быть опосредованы рецептором CD36.

3. Получение фактора активации макрофагов , полученного из белка Gc ( GcMAF ), его структурная характеристика и биологическая активность .

Мохамад, Сахаруддин Бин; Нагасава, Хидеко; Уто, Ёсихиро; Хори, Хитоши

01.01.2002

Сообщается, что белок Gc является предшественником фактора активации макрофагов , происходящего из белка Gc ( GcMAF ), в каскаде активации макрофагов , вызванном воспалением .

Индуцибельная бета-галактозидаза В-клеток и нейраминидаза Т-клеток превращают белок Gc в GcMAF . Белок Gc из сыворотки человека очищали с помощью аффинной колоночной хроматографии на 25(OH)D3 и модифицировали до GcMAF с использованием иммобилизованных гликозидаз (бета-галактозидазы и нейраминидазы).

Структура сахарного фрагмента GcMAF была охарактеризована методом блоттинга лектина с помощью агглютинина Helix pomatia.

Биологическую активность GcMAF оценивали с помощью анализа образования супероксида и анализа фагоцитоза . Мы успешно очистили белок Gc из сыворотки человека. GcMAF был обнаружен методом лектин-блоттинга и показал высокую биологическую активность .

Наши результаты подтверждают важность терминального фрагмента N-ацетилгалактозамина в GcMAF-опосредованном каскаде активации макрофагов и существование конститутивного GcMAF в сыворотке человека. Эти предварительные данные важны для создания низкомолекулярных имитаторов GcMAF .

4. Иммунотерапия рака простаты с помощью фактора активации макрофагов , полученного из белка Gc , GcMAF .

Ямамото, Нобуто; Суяма, Хирофуми; Ямамото, Нобуюки

01.07.2008

Сывороточный белок Gc (известный как белок, связывающий витамин D(3)) является предшественником основного фактора активации макрофагов (MAF).

Активность предшественника MAF белка Gc сыворотки пациентов с раком простаты была потеряна или снижена, поскольку белок Gc дегликозилировался сывороточной альфа-N-ацетилгалактозаминидазой (нагалазой), секретируемой из раковых клеток.

Следовательно, макрофаги больных раком простаты, имеющие дегликозилированный белок Gc, не могут активироваться , что приводит к иммуносупрессии.

Поэтапная обработка очищенного белка Gc иммобилизованной бета-галактозидазой и сиалидазой позволила получить самый мощный из когда-либо обнаруженных MAF (называемый GcMAF ), который не оказывает никакого вредного воздействия на человека.

Макрофаги, активированные GcMAF , развивают значительное разнообразие рецепторов, которые распознают аномалии на поверхности злокачественных клеток и обладают высокой онкоцидной активностью.

Шестнадцать пациентов с раком простаты без анемии получали еженедельное введение 100 нг GcMAF . По мере увеличения активности предшественников MAF активность их сывороточной нагалазы снижалась.

Поскольку активность нагалазы в сыворотке пропорциональна опухолевой нагрузке, весь анализ динамики терапии GcMAF контролировали путем измерения активности нагалазы в сыворотке.

После 14–25 еженедельных введений GcMAF (100 нг/неделю) у всех 16 пациентов наблюдались очень низкие уровни нагалазы в сыворотке крови, эквивалентные уровням здорового контроля, что указывает на отсутствие опухолей у этих пациентов. Рецидивов не было в течение 7 лет.