Существуют разногласия относительно структуры О-гликана, присоединенного к белку, связывающему витамин D человека (DBP). Ранее сообщалось, что O-гликан продукта аллеля Gc1S представляет собой линейный кор 1 трисахарида NeuNAc-Gal-GalNAc-Thr.

Здесь структурные доказательства гликанов представлены на основе анализа гликановых связей и более 30 серийных экспериментов по расщеплению гликозидазами, за которыми следовал анализ интактного белка с помощью масс-спектрометрии с ионизацией электрораспылением (ESI-MS).

Результаты показывают, что О-гликан белка Gc1F представляет собой тот же линейный трисахарид, что и белок Gc1S, а остаток гексозы представляет собой галактозу.

Кроме того, предполагаемое противораковое производное DBP, известное как фактор активации макрофагов, полученный из белка Gc (GcMAF, который образуется в результате комбинированного действия β-галактозидазы и нейраминидазы на DBP), было проанализировано в неизмененном виде с помощью ESI-MS, показав, что активация β-галактозидазы E. coli ничего не отщепляет от белка, оставляя гликановую структуру активного GcMAF в виде дисахарида Gal-GalNAc-Thr, независимо от порядка применения β-галактозидазы и нейраминидазы.

Более того, результаты расщепления гликозидазой показывают, что α-N-ацетилгалактозаминдаза (нагалаза) не обладает эндогликозидной функцией и расщепляет О-гликан DBP только после того, как он был урезан до моносахарида GalNAc-Thr, что исключает возможность удаления этим ферментом О-гликана. трисахарид из ДАД онкологического больного in vivo.

Ключевые слова: дисахарид; ЭСИ-МС; ГкМАФ; Линейный трисахарид; Анализ связей; Белок, связывающий витамин D.

© Elsevier Inc., 2016. Все права защищены.