Нагалаза (альфа-n-ацетилгалактозаминидаза — это фермент, который дегликозилирует белок Gc, также известный как белок, связывающий витамин D (VDBP). Таким образом, белок Gc становится неспособным к превращению в активный GcMAF. В результате предотвращается регуляция активации макрофагов.

Активность α-N-ацетилгалактозаминидазы (Nagalase) в сыворотке или плазме крови определяется с помощью запатентованного метода, состоящего из двухступенчатого иммунокапсульного анализа.

Известно, что нагалаза инактивирует Gc-MAF и его естественный предшественник Gc-глобулин. Предполагается, что пациенты могут получать заместительную терапию с использованием Gc-MAF, а Nagalase будет использоваться в качестве маркера (индикатора) эффективности терапии Gc-MAF.

Мы хотим сообщить вам, что мы внедрили новый усовершенствованный метод для измерения Nagalase для пациентов, известный как NAGAnew. Он отличается улучшенным измерением нагалазы, различающим активность свободной нагалазы, связанное количество неактивной нагалазы и общее количество нагалазы (свободная плюс связанная).

Значения нового метода измерения нагалазы отличаются от тех, о которых сообщалось ранее, а нормальные пределы (P10–P90) отличаются от тех, о которых сообщалось ранее (новая оценка на основе сывороток нормальных здоровых людей), которые необходимо сравнивать с распределение значений, наблюдаемых у разных типов пациентов (рак молочной железы, рак яичников, рак толстой кишки, рак поджелудочной железы…)

Используя эти 3 параметра и их увеличение в крови, можно использовать в качестве диагностического и прогностического значения для определенного типа рака у каждого пациента.

Их уровень можно определить. В уровень этого набора анализов будет включаться эквивалент старого набора параметров. Для определения уровней комплекса Nagalase-GcMAF устанавливается отдельный уровень.

В старом тесте NAGALASE показатель видимого уровня нагалазы означает ферментативную активность нагалазы, определяемую в разбавленной сыворотке с помощью специфического субстрата, полученного из умбеллиферила, но аналитический метод представляет собой кинетическое измерение. В новом методе, называемом свободной нагалазой, мы также используем тот же субстрат, полученный из умбеллиферила, для нагалазы, но метод определения представляет собой измерение конечной точки, что делает тест более надежным и менее подверженным помехам. В старом методе калибровка была основана на пуле сывороток более 300 доноров, в то время как в новом методе калибровка основана на сигнале точного количества конечного продукта превращенного субстрата, т.е. умбеллиферона. Такой подход к калибровке и метод конечной точки измерения делают определение более стабильным и надежным.   В новом методе диапазон снова был определен на популяции из более чем 300 нормальных здоровых контролей, и, как ожидалось, этот диапазон расположен ниже, чем в старом методе. Это согласуется с медианными значениями, полученными на нормальных здоровых донорах для обоих методов, т.е. 0,73 для старого метода и 0,43 для нового метода.

Для параметров эффективной нагалазы (старый) и общей нагалазы (новый) эти два параметра предназначены для того, чтобы дать представление об общем количестве нагалазы в циркуляции, т.е. свободной нагалазы (измеряемой непосредственно через ее ферментативную активность) плюс циркулирующей связанной нагалазы (ферментативно неактивной или блокированной).

По этим параметрам мы наблюдаем большие различия между старым и новым методом. В старом методе эффективная нагалаза рассчитывалась на основе уровней свободной нагалазы и Gc-глобулина, в новом методе общая нагалаза (свободная + связанная) осаждается из сыворотки, преобразуется в ферментативно активный фермент и измеряется как общее содержание нагалазы в сыворотке. Нормальные диапазоны и медианные значения в обоих методах были определены на популяции из 300 нормальных здоровых контрольных групп.  Для сравнения можно применить принцип соотношения старого результата и медианного значения нормальной популяции, т.е. старое значение более 1,03 (медиана старого метода), против соотношения значения нового метода более 1,44 (медиана нового метода), а затем соотношение двух полученных значений.

В дополнение к вышеупомянутому набору параметров был разработан совершенно новый параметр, позволяющий получить представление о реакции врожденного иммунного ответа.

Врожденный иммунный ответ пациента модулируется активностью макрофагов, моноцитов и дендритных клеток. Эта активность стимулируется фактором активации макрофагов, т.е. Gc-MAF, концентрация которого в крови очень низкая. Более того, этот Gc-MAF немедленно удаляется после его связывания с нагалазой и связывания с макрофагами, моноцитами и дендритными клетками, которые становятся активированными. До сих пор никому не удавалось измерить свободный Gc-MAF в сыворотке или плазме. Однако помимо клеточного захвата Gc-MAF этот активирующий фактор также удаляется из крови в виде стабильного комплекса с ферментом нагалазы, и количество этого комплекса нагалаза-GcMAF является дополнительным параметром для мониторинга врожденной иммунной защиты. Если происходит инвазия через раковые клетки, очевидно, имеется дефект врожденной иммунной системы из-за низкой продукции Gc-MAF из его предшественника Gc-глобулина. А снижение циркулирующего комплекса Gc-MAF является маркером дефектной врожденной иммунной системы и может использоваться для диагностики рака и для мониторинга терапии рака с помощью добавок, подобных Gc-MAF. Этот набор дополнительных параметров будет оплачиваться отдельно, когда этот тест запрашивает врач.

Метод определения Gc-глобулина был изменен с турбидиметрии на метод ИФА. Однако калибровка обоих тестов осталась прежней, и стандарт обоих методов основан на пуле сывороток, включающем более 300 сывороток нормальных здоровых людей из контрольной группы.

Нормальные диапазоны для старой версии теста и новой версии теста были основаны на процентильных значениях P10 (нижний предел) и P90 (верхний предел) сыворотки из более чем 300 нормальных здоровых контролей. Среднее значение этой нормальной популяции немного сдвинулось с 420,71 мг/л (старый метод) до 451,03 для нового метода (ELISA). Gc-глобулин в основном синтезируется в печени, и можно ожидать физиологических изменений в зависимости от времени и функции печени. Только если Gc-глобулин имеет тенденцию к постоянному снижению, это может свидетельствовать о снижении функции печени, что в конечном итоге приводит к печеночной недостаточности. Однако только при уровне ниже 100 мг/л возникает острая опасность печеночной недостаточности. При уровнях выше 300 мг/л нет никаких оснований допускать, что уровень этого предшественника должен влиять на нормальный синтез Gc-MAF и воздействовать на врожденную иммунную систему.

Значение DPP4 по-прежнему предоставляется, и метод остается прежним. DPP4 является маркером активации Т-клеток, присутствующим на многих иммунных клетках, но их количество увеличивается при активации иммунитета. Часть связанной с мембраной DPP4 может выделяться в плазме/сыворотке, где она измеряется. Повышенное значение Dpp4 должно быть связано с иммунной активацией различного генеза (инфекция, воспаление, аутоиммунитет и др.). Низкий уровень DPP4 связан с синдромом хронической усталости, и некоторые опухоли могут выделять очень большое количество DPP4 в сыворотке.

Таким образом, в новых формах запросов указаны 2 панели Nagalase:

NAGAnew1 («та же» цена, 95€ для Европы, 107$ для США), отображающий 4 параметра:
общая Нагалаза,
свободная Нагалаза,
связанная Нагалаза,
ДПП4.

NAGAnew2 (180€ для Европы, 211$ для США), отображающий 6 параметров:
общая Нагалаза,
свободная Нагалаза,
связанная Нагалаза,
Комплекс нагалаза-GcMAF,
Gc-белок,
ДПП4.

https://drive.google.com/file/d/1sRm2neWJsRexguP9mtqvW1Nbngxugh2T/view
Письмо R.E.D. LABORATORIES о новом анализе на нагалазу.

 

Dear Colleagues,

We want to inform you that we implemented a new improved method for the measurement of patients Nagalase, reported as NAGAnew. It features an improved nagalase measurement differentiating the free nagalase activity, the bound amount of non-active nagalase and the total amount of nagalase (free plus bound).

…

Читать в первоисточнике. Эта информация есть ранее в подборке.