https://www.researchgate.net/figure/nagalase-levels-before-and-after-gcMAF-therapy_tbl2_258216392

Данные на этом сайте взяты из статьи «GC protein-derived macrophage-activating factor decreases α- N -acetylgalactosaminidase levels in advanced cancer patients» August 2013 OncoImmunology

https://www.researchgate.net/publication/258216392_GC_protein-derived_macrophage-activating_factor_decreases_a-_N_-acetylgalactosaminidase_levels_in_advanced_cancer_patients

«GC protein-derived macrophage-activating factor decreases α— N -acetylgalactosaminidase levels in advanced cancer patients»

Научная статья.

August 2013 OncoImmunology 2(8):e25769

DOI:10.4161/onci.25769

SourcePubMed

LicenseCC BY-NC 3.0

Authors:
1. Lynda Thyer (MacroInnovations Ltd.; Cambridge, UK),
2. Emma Ward, (MacroInnovations Ltd.; Cambridge, UK)
3. Rodney Smith (MacroInnovations Ltd.; Cambridge, UK)

  1. Jacopo J. V. Branca (Department of Experimental and Clinical Medicine; Universi ty of Firenze; Firenze, Italy)
  2. Gabriele Morucci (Department of Experimental and Clinical Medicine; Universi ty of Firenze; Firenze, Italy),
  3. Massimo Gulisano, (Department of Experimental and Clinical Medicine; Universi ty of Firenze; Firenze, Italy),
    7. David Noakes, (Immuno Biotech Ltd.; Guernsey, UK),
  4. Robert Eslinger (Reno Integrative Medical Center; Reno, NV USA),
    9. Stefania Pacini (Department of Experimental and Clinical Medicine; Universi ty of Firenze; Firenze, Italy).
    Keywords: cancer, complementary medicine, immunotherapy, macrophages, Vitamin D

Abbreviations: BCG, bacillus Calmette-Guérin; CA-125, cancer antigen 125; GalNAc, N-acetylgalactosamine; GcMAF, GC protein-derived macrophage-activating factor; PINI, prognostic inflammatory and nutritional index; PSA, prostate-specific antigen; VDBP, vitamin D-binding protein; VDR, vitamin D receptor.

 

α-N-ацетилгалактозаминидаза (нагалаза) накапливается в сыворотке крови больных раком, и ее активность коррелирует с тяжестью опухоли, агрессивностью и клиническим течением заболевания. Введение GC protein-derived macrophage-activating fac tor (GcMAF) онкологическим больным с повышенным уровнем нагалазы ассоциируется со снижением активности нагалазы в сыворотке крови и значительными клиническими результатами. Здесь мы сообщаем о результатах применения GcMAF у гетерогенной когорты пациентов с гистологически различными новообразованиями на поздних стадиях, которые обычно считаются «неизлечимыми» заболеваниями. В большинстве случаев терапия GcMAF была начата на поздних стадиях прогрессирования опухоли. Поскольку это открытый, неконтролируемый, ретроспективный анализ, необходимо соблюдать осторожность при установлении причинно-следственных связей между приемом GcMAF и исходом заболевания. Тем не менее, ответ на GcMAF был в целом устойчивым, и выявились некоторые тенденции. У всех пациентов (n = 20) наблюдалась повышенная активность нагалазы в сыворотке крови, значительно превышающая нормальные значения. У всех пациентов, кроме одного, наблюдалось значительное снижение активности нагалазы в сыворотке крови после еженедельных инъекций GcMAF. Снижение активности нагалазы было связано с улучшением клинического состояния, и не было зарегистрировано никаких побочных эффектов. Представленные здесь наблюдения подтверждают и расширяют предыдущие результаты и прокладывают путь к дальнейшим исследованиям, направленным на оценку точной роли и показаний к противораковой иммунотерапии на основе GcMAF.

Введение
Известно, что α-N-ацетилгалактозаминидаза (нагалаза) накапливается в сыворотке крови больных раком, где она опосредует дегликозилирование группоспецифического компонента (ГК), наиболее известного как витамин D-связывающий белок (VDBP), который является предшественником протеиндетерминантного макрофаг-активирующего фактора (GcMAF). Дегликозилированный VDBP не может быть преобразован в GcMAF (1), а снижение уровня GcMAF, как сообщается, способствует развитию иммунодефицита у людей с распространенными новообразованиями.(2)

Повышение активности нагалазы, наблюдаемое у больных раком, в основном связано с тем, что злокачественные клетки выделяют ферментативно-активную нагалазу.(3)

Таким образом, активность нагалазы в сыворотке крови отражает не только тяжесть и агрессивность опухоли, но и клиническое течение заболевания.(4-7)
В настоящее время оценка активности нагалазы в сыворотке крови предлагается в качестве надежного средства для определения клинической тяжести множественных новообразований.(3)

В сыворотке крови нагалаза действует как эндо- (но не как экзо-) фермент, не способный дегликозилировать N-ацетилгалактозамин (GalNAc) остаток GcMAF.(5)

Таким образом, циркулирующая нагалаза не может разрушать экзогенный GcMAF.(5-7) Это наблюдение позволило предположить, что пациентам с повышенной активностью нагалазы может быть полезно экзогенное введение GcMAF. Кроме того, GcMAF оказывает противораковое действие in vivo и in vitro, как в экспериментальных, так и в спонтанных моделях опухолей. Учитывая влияние GcMAF на макрофаги и их центральную роль в противораковых иммунных реакциях, GcMAF широко рассматривается в качестве иммунотерапевтического агента.(7)

Однако, помимо стимуляции макрофагов, проникающих в опухоль,(8) GcMAF не только непосредственно ингибирует пролиферацию различных раковых клеток человека in vitro,(9,10) но и изменяет злокачественный фенотип клеток рака молочной железы человека.(10)
Более того, GcMAF подавляет ангиогенез, тем самым лишая неопластические очаги кислорода и питательных веществ, необходимых для развития опухоли и метастазирования.(10-13)

Недавно было выдвинуто предположение, что антинеопластические эффекты GcMAF опосредуются рецептором витамина D (VDR), и было продемонстрировано, что GcMAF стимулирует внутриклеточный сигнальный путь, влияющий на циклический AMP. Этот каскад сигнальной трансдукции может быть ответственен за гибель злокачественных клеток, подвергшихся воздействию GcMAF.(12)

Вместе взятые, эти данные, полученные in vitro и in vivo, обосновывают наблюдение, что GcMAF оказывает значительный противораковый эффект у (по крайней мере, у части пациентов с распространенным раком).(5-7)

Следует отметить, что в вышеупомянутых исследованиях противораковый эффект GcMAF оценивался путем измерения активности нагалазы в сыворотке крови как маркера опухолевого бремени и прогрессии.(2,3,14)

Биологические эффекты GcMAF были задокументированы в различных экспериментальных системах и стали предметом более 50 рецензируемых работ, опубликованных за последние 20 лет.(15)

Благодаря серьезному научному обоснованию, лежащему в основе комплексного применения GcMAF у пациентов с распространенным раком, сотни врачей во всех частях мира приняли этот подход для лечения различных показаний, при которых он может оказаться полезным.

Здесь мы приводим серию клинических случаев, иллюстрирующих результаты, полученные при применении GcMAF у пациентов с различными типами прогрессирующего рака, уделяя особое внимание влиянию GcMAF на активность нагалазы в сыворотке крови.

Мы прекрасно понимаем, что эти случаи, в силу их неоднородности и малого количества, можно считать эпизодичными. Однако совсем недавнее исследование по оценке клинической практики настоятельно рекомендует пересмотреть оценку отдельных случаев, подобных представленным здесь (16).

Таким образом, в то время как некоторые исследования представляют большие и впечатляющие статистические данные, полученные из больших клинических когорт, другие могут сообщать об ограниченном количестве заслуживающих внимания случаев, как это делаем мы.
Согласно этому новому, авторитетному, эпистемологическому подходу, «все эти истории становятся свидетельством того, что работает в медицине»(16).

Поэтому мы считаем, что приведенные ниже клинические случаи указывают на положительный эффект от применения GcMAF у больных раком на поздних стадиях, что побуждает к проведению дальнейших исследований для официального рассмотрения этой возможности.

Таблица 1. Уровень нагалазы до и после терапии gcMAF

*значения активности нагалазы в сыворотке представлены в виде нМ/мин/мг. Последний столбец (разница нагалазы до и после) иллюстрирует снижение активности нагалазы в сыворотке крови между началом терапии gc protein-derived macrophage-activating factor (gcMAF) (до) и последней временной точкой тестирования (после). Для пациентов, у которых активность нагалазы в сыворотке крови исследовалась более двух раз, результаты дополнительного определения (первое после) представлены в колонке «Результаты первого после». 
*p < 0,05; **p < 0,01. сА — карцинома.

Результаты

Средняя активность нагалазы в сыворотке крови до лечения GcMAF, зарегистрированная в нашей когорте пациентов, составила 2,84 ± 0,26 нМ/мин/мг, с диапазоном 1,00-5,60 нМ/мин/мг (Таблица 1).
На момент повторного тестирования (средний интервал = 112 дней) средняя активность нагалазы в сыворотке крови на фоне лечения GcMAF составила 2,01 ± 0,22 нМ/мин/мг, с диапазоном 1,00-3,20 нМ/мин/мг.
Разница между этими значениями была статистически значимой (p < 0,05).

Следует отметить, что ни один пациент из этой когорты изначально не находился в пределах лабораторного референсного диапазона активности нагалазы в сыворотке крови (0,90-0,92 нМ/мин/мг).
На момент окончательного тестирования (средний интервал = 263 дня) средняя активность нагалазы в сыворотке крови у данной группы пациентов составила 1,59 ± 0,17 нМ/мин/мг, с диапазоном 0,60-2,80 нМ/мин/мг.
Разница между этим значением и активностью нагалазы в сыворотке крови, зарегистрированной до начала приема GcMAF, также была статистически значимой (p < 0,01).

Рисунок 1. Временной график курса лечения GcMAF у 7 онкологических больных с активностью нагалазы в сыворотке крови в качестве прогностического показателя. Данные соответствуют пациентам, описанным в разделе «Повествовательное описание некоторых примечательных клинических случаев из Нидерландов». Определение активности нагалазы в сыворотке крови не проводилось в одну и ту же временную точку у каждого отдельного пациента, как указано в таблице 1. Пациенты обозначены последовательными номерами, как в разделе результатов и Таблице 1.

Повествовательное описание некоторых примечательных клинических случаев из Нидерландов.
Следующие отчеты были собраны и переданы д-ром Стивеном Хофманом (CMC, Капелле-ан-ден-Иджсел; Нидерланды) и относятся к 2011-2012 годам.
В дополнение к GcMAF большинству пациентов был назначен прием витаминов D и A.
Дополнительные добавки показаны в случае необходимости.
Большинство пациентов не принимали обычную противораковую химиотерапию одновременно с GcMAF-терапией.
 Однако некоторые пациенты проходили традиционную противораковую терапию в предыдущие годы, как указано в отдельных отчетах.
Если пациенты принимали обычную терапию, например, гормоны, во время приема GcMAF (например, пациент №8), это указано в индивидуальном отчете. Если не указано иное, пациенты получали 100 нг GcMAF еженедельно, в виде одной внутримышечной инъекции, в соответствии с общепринятыми рекомендациями.(5-7)
Оригинальные отчеты выделены курсивом. Каждый случай обозначен как в таблице 1.

На рисунке 1 показано снижение активности нагалазы в сыворотке крови в группе пациентов в зависимости от последовательного тестирования.
Следует отметить, что поскольку это ретроспективный анализ, а не клиническое исследование, определение нагалазы не проводилось в одну и ту же временную точку у каждого отдельного пациента. Однако общая форма графика очень похожа, если не полностью накладывается на другие графики такого же типа, о которых сообщалось ранее (5-7,17).

  1. Мужчина, 1950 года рождения.
    Карцинома мочевого пузыря с 2009г, ранее лечился химиорастворами местно.
    Уровень нагалазы при поступлении 4 июля 2011 года: 3.10.
    10 февраля 2012 года: 2,30.
    25 мая, 2012: 1.80.
    26 октября 2012 года: 1.40.
    Лечение с помощью
    GcMAF и акупунктуры, позже только GcMAF (позже внутривенно). Мочевой пузырь признан чистым (при обследовании урологом) летом 2012 года. Лечение GcMAF продолжается. В этом случае последовательное снижение активности нагалазы в сыворотке крови было связано со значительным клиническим улучшением.

Снижение активности нагалазы было заметно при первом анализе после лечения, примерно через 7 месяцев после начала лечения GcMAF, и сохранялось до последнего доступного определения, т.е. примерно 15 месяцев после этого. Разница в активности нагалазы в сыворотке крови зафиксированная перед последним определением и перед началом терапии GcMAF составила -1,70 нМ/мин/мг.

  1. Женщина, 1944 года рождения.
    Карцинома мочевого пузыря, лечилась с 2011 года у уролога с помощью кюретажа и БЦЖ.
    Уровень нагалазы на момент презентации 9 мая 2011 года: 4.10.
    24 октября 2011 года: 2,30.
    3 апреля 2012 года: 1.40.
    10 сентября 2012 г.: 1.00.
    4 декабря 2012 года: 0.75.
    В течение периода тестирования нагалазы пациенту было рекомендовано еженедельно вводить внутримышечно
    GcMAF, но пациент не был последовательным. В этот период лечащий уролог несколько раз констатировал хорошее состояние мочевого пузыря. Также в этом случае последовательное снижение активности нагалазы в сыворотке крови было связано со значительным клиническим улучшением. Такое снижение активности нагалазы было заметно при первом тестировании после лечения, примерно через 5 месяцев после начала лечения GcMAF, и сохранялось до последнего доступного определения, т.е. примерно через 19 месяцев после этого. Разница в активности нагалазы в сыворотке крови, зарегистрированная до последнего определения и до начала терапии GcMAF, составила -3,35 нМ/мин/мг.
    Последнее доступное значение активности нагалазы в сыворотке крови — 0,75 М/мин/мг, было в пределах нормы.
  2. Мужчина, 1937 года рождения.
    Карцинома простаты обнаружена по результатам ПСА в 2009 году, специфических жалоб нет. Лечился гормональными инъекциями, которые дали жалобы. До этого, и в том же году, была обнаружена карцинома толстой кишки, и прооперирована после облучения и химиотерапии (нет нелеченной опухоли/метастазов, вероятно).
    Уровень нагалазы при поступлении на
    6 апреля 2011 года: 2,00.
    29 августа 2011 года: 1.20.
    5 января 2012 года: 0.81.
    5 июля 2012 года: 0.67.
    6 декабря 2012 года: 0.75.
    Лечение иглоукалыванием и
    GcMAF; через некоторое время гормональная терапия была прекращено и жалобы, также неспецифические, значительно улучшились. Остается под низкочастотным наблюдением.
    Снова активность нагалазы в сыворотке крови вернулась к нормальным значениям (0,75 нМ/мин/мг) примерно через 20 мес лечения
    GcMAF. Снижение активности нагалазы, однако, было заметно уже при первом тестировании, т.е. через 4 мес. после начала лечения GcMAF. Согласно литературным данным (7) , нормализация уровня нагалазы в сыворотке крови у больных раком предстательной железы может представлять собой показатель эрадикации опухоли.
  3. Мужчина, 1948 года рождения.
    Карцинома предстательной железы в 2008 году; простата экстирпирована в 2009 году с хорошим прогнозом. Однако специфические симптомы усталость и боль сохранялись. Было начато лечение
    GcMAF, а также и несколько сеансов иглоукалывания.
    Уровень нагалазы на момент презентации
    21 октября 2011 года: 1.90.
    2 февраля 2012 года: 1.70.
    19 окт, 2012: 1.20.
    Жалобы постепенно уменьшались, и инъекции в дальнейшем проводились внутривенно. Лечение продолжается.
  4. Женщина, 1947 года рождения.
    Карцинома левой молочной железы (обнаружена при обследовании), оперирована с удалением дозорных узлов в 2010 году, химиотерапия 4 из 6 серий, специфических жалоб не осталось. Сохраняется недомогание, утомляемость и нарушение сна.
    Уровень нагалазы при поступлении
    9 августа 2011 г: 1.70.
    16 января 2012 года: 1.00.
    12 марта 2012 года: 0.72.
    11 декабря 2012 года: 0.60.
    Лечение
    GcMAF (преимущественно внутривенно) в сочетании с иглоукалыванием. Прием GcMAF прекращен в апреле 2012 года. Аспецифические жалобы уменьшились. Пациентка по-прежнему наблюдается каждые несколько месяцев. Значительное снижение активности нагалазы в сыворотке крови наблюдалось после 5 месяцев лечения GcMAF. Такое снижение сохранялось даже после прекращения приема GcMAF, а активность нагалазы в сыворотке крови нормализовалась примерно через 16 месяцев после начала терапии.
    Согласно литературным данным, (5) нормализация активности нагалазы в сыворотке крови у больных карциномой молочной железы может представлять собой показатель эрадикации опухоли.
  5. Женщина, 1950 года рождения. Карцинома левой молочной железы, специфические жалобы, возможны метастазы. После локальной операции, облучения грудной клетки, в сочетании с химиотерапией, Герцептин-терапия. Частично жалобы в связи с лечением.
    Уровень нагалазы при поступлении
    11 мая 2011 года: 5.60.
    6 октября 2011 года: 2,90.
    21 февраля 2012 года: 1.80.
    18 октября 2012 года: 1.10.
    Лечилась внутримышечно, затем внутривенно
    GcMAF и несколько сеансов иглоукалывания. Жалоб больше нет (прошли через 3-6 недель), продолжает принимать внутривенный GcMAF. Значительное снижение активности нагалазы в сыворотке крови наблюдалось примерно через 5 месяцев после начала терапии. Примерно через 17 месяцев после начала лечения GcMAF, уровень нагалазы в сыворотке крови приблизился к нормальным значениям.
  6. Мужчина, 1941 года рождения.
    Карцинома гортани обнаружена и лечился с помощью кюретаж и облучение в 2010 году. Геморрагический ректоколит в анамнезе, жалобы после 2005 года незначительные. Карцинома мочевого пузыря обнаружена в 2011 году, лечился местным кюретажем и несколькими циклами БЦЖ-инстилляций. Жалобы связаны с ростом опухоли и лечением, химиотерапия не проводилась. Лечение состояло из иглоукалывания и внутримышечных, а позже внутривенных инъекций
    GcMAF еженедельно.

Уровень нагалазы при поступлении
16 мая 2011 года: 4.70.
Октябрь 4, 2011: 2.00.
10 февраля 2012 года: 1.20.
15 июня 2012 года: 1.00.
23 октября 2012 года: 0.88.
20 декабря 2012 года: 0.90.
Во время иммунотерапии
GcMAF произошли интересные события.
Настаивая на экстирпации мочевого пузыря по показаниям урологов, пережил смену лечащего уролога, два повторных заключения в специализированной онкологической клинике, а затем у уролога из назначенной операционной бригады.
Со стороны пациента было несколько благоприятных изменений в образе жизни, таких как прекращение курения и ежедневный прием масла печени трески и листьев шалфея (по его собственной инициативе).
С учетом мнения урологов решил принимать
GcMAF два раза в неделю в течение шести недель. Последнее мнение лечащего уролога было отложить принятие более окончательного решения об операции до февраля, так как в январе 2013 года слизистая оболочка мочевого пузыря стала выглядеть намного лучше.
В сложившейся ситуации три названных действующих лица испытывают оптимизм. В данном случае значительное снижение активации нагалазы в сыворотке крови после введения
GcMAF было связано со значительными клиническими преимуществами, что соответствует предыдущим сообщениям(7).

Повествовательное описание некоторых примечательных клинических случаев из Соединенных Штатов Америки.
Следующие сообщения были переданы RE и относятся к 2012-2013 годам.
У большинства пациентов еженедельное введение 100 нг
GcMAF внутривенно было начато в августе 2012 года, а первая оценка активности нагалазы в сыворотке крови была проведена непосредственно перед началом лечения.

Ни один из пациентов не принимал обычную противоопухолевую химиотерапию одновременно с GcMAF. Здесь мы сообщаем только о тех случаях, для которых было доступно как минимум два определения нагалазы.

  1. Мужчина, возраст 64 года. Карцинома мочевого пузыря.
    Уровень нагалазы при первом тестировании
    в октябре 2012 года: 2,90.
    В январе 2013 года: 2,60. Улучшение.
    В данном случае снижение активности нагалазы в сыворотке крови было зафиксировано примерно через 3 месяца лечения GcMAF и было связано с клиническим улучшением.
  2. Женщина, возраст 60 лет. Карцинома яичников.
    Уровень нагалазы при первом тестировании
    в июне 2012 года: 3.30.
    Ноябрь 2012 года: 2,80.
    Опухолевый маркер
    CA-125 в декабре 2012 года: 15.7.
    В феврале 2013 г.: 19,1.

Еженедельное применение GcMAF привело к значительному снижению активности нагалазы в сыворотке крови примерно через 3 месяца.
Такое снижение было связано с клиническими преимуществами. Однако эти изменения не были (пока) связаны со снижением циркулирующего уровня ракового антигена 125 (
CA-125), другого маркера опухоли.

  1. Мужчина, возраст 67 лет. Карцинома предстательной железы.
    Уровень нагалазы при первом тестировании в
    августе 2012 года: 3.40.
    В декабре 2012 года: 2.80.
    Улучшение.
    В данном случае клинические преимущества были связаны со значительным снижением активности нагалазы в сыворотке крови примерно через 4 месяца после начала терапии GcMAF. Эти результаты согласуются с данными, представленными выше, а также с ранее описанными случаями.(7)
  2. Мужчина, возраст 63 года. Сквамозно-клеточная карцинома языка.

Уровень нагалазы при первом анализе
в июле 2012 года: 3.00.
В сентябре 2012: 1.50.
В декабре 2012 года: 1.00.
Улучшение.
Опять же, клиническое улучшение было связано со значительным снижением активности нагалазы в сыворотке крови, которая приблизилась к норме примерно через 5 мес. Насколько нам известно, это первый случай, когда пациент с плоскоклеточной карциномой языка получал GcMAF.
Пациентка № 13 (табл. 1) также получала
GcMAF по поводу плоскоклеточной карциномы языка и показала снижение активности нагалазы в сыворотке крови примерно через 3 месяца.

  1. Мужчина, возраст 54 года. Колоректальный рак.
    Уровень нагалазы при первом тестировании
    в июле 2012 года: 3.90.
    В октябре 2012 года: 2,00.
    Прекращено.
    В данном случае, значительное снижение активности нагалазы в сыворотке крови могло быть примерно через 3 месяца после начала приема GcMAF терапии. Нам неизвестны причины, которые привели к прекращению лечения.
  2. Женщина, возраст 58 лет. Сквамозно-клеточная карцинома головы и шеи. Уровень нагалазы при первом тестировании
    в июне 2012 года: 2,90.
    В июле 2012 г: 2.70.
    В феврале 2013 года: 2,00.
    Улучшение.
    В данном случае минимальное снижение активности нагалазы в сыворотке крови, наблюдаемое после 1 мес приема
    GcMAF было связано с клиническими преимуществами.
  3. Женщина, возраст 35 лет. Сквамозно-клеточная карцинома.
    Уровень нагалазы при первом тестировании
    в июне 2012 года: 1.50.
    В сентябре 2012 г: 1.10.

Прием препарата прекращен. В данном случае снижение активности нагалазы в сыворотке крови наблюдалось после 3 месяцев терапии GcMAF. Нам неизвестны причины, которые привели к прекращению лечения.

  1. Женщина, возраст 69 лет. Фолликулярная лимфома.
    Уровень нагалазы при первом тестировании
    в июне 2012 года: 1.00.
    В августе 2012 г: 1.30.
    В январе 2013 года: 1.20.
    Улучшение.
    В данном случае не было выявлено связи между активностью нагалазы в сыворотке крови, лечением GcMAF и клиническим состоянием.
  2. Женщина, возраст 66 лет. Лимфома.
    Уровень нагалазы при первом тестировании
    в августе 2012 года: 2,20.
    В ноябре 2012 г: 1.90.
    Улучшение.
    В данном случае клиническое улучшение было связано со значительным снижением активности нагалазы в сыворотке крови примерно через 3 месяца после начала лечения GcMAF.

Обсуждение
Было показано, что GcMAF подавляет множество аспектов неопластической трансформации in vitro в различных моделях опухолей.(5-10)
Клинические случаи, представленные здесь, неоднородны и относятся к пациентам с различными типами новообразований и на разных стадиях злокачественной прогрессии.
Эти случаи включают пациентов с раком, у которых эффекты GcMAF не были описаны ранее, например, пациенты с различными типами карциномы головы и шеи (включая опухоли гортани и языка), лимфома, олигодендроцитома и карцинома яичников.
В некоторых случаях пациенты были одновременно поражены несколькими типами опухолей, о чем сообщается в повествовательном описании.
Во многих случаях пациенты получали GcMAF вместе с другими дополнительными методами лечения, такими как иглоукалывание или прием пищевых добавок.
Во всех случаях терапия GcMAF была начата на поздних стадиях прогрессирования опухоли. Так как на менее продвинутых стадиях традиционные методы лечения были предпочтительнее, предпочтение отдавалось традиционным методам лечения. Таким образом, большинство описанных здесь случаев попадают под категорию сострадательного лечения.
Фактически, большинство этих пациентов проходили традиционную противораковую терапию в предыдущие годы и были направлены на лечение GcMAF, когда обычная химио- или радиотерапия оказалась неэффективной или непереносимой, как описано в отдельных отчетах.
Поскольку это открытый, неконтролируемый, ретроспективный анализ, необходимо проявлять осторожность в определении причинно-следственной связи между лечением и клиническим исходом.
Тем не менее, ответ на GcMAF часто был относительно устойчивым, и выделяются определенные тенденции.

Тенденции на примере голландских случаев. (1)
Все пациенты имели активность нагалазы в сыворотке крови значительно выше нормального значения, т.е. около 0,95 нМ/мин/мг. (2)
У всех пациентов наблюдалось значительное снижение активности нагалазы в сыворотке крови после инъекций GcMAF. (3)

Во всех случаях активность нагалазы в сыворотке крови была снижена и такое снижение сохранялось при последующих определениях. (4)
В 4/7 случаях активность нагалазы в сыворотке крови вернулась к нормальному уровню впоследнем исследовании.

Тенденции американских случаев. (1)
У всех пациентов, кроме одного, активность нагалазы в сыворотке крови была значительно выше нормального значения.

Пациент № 18, действительно, имел активность нагалазы в сыворотке крови которая была очень близка к норме. (2)
У большинства пациентов наблюдалось значительное снижение активности нагалазы в сыворотке крови после введения GcMAF.
У пациента №18 такое снижение не было связано с клинической пользой, хотя активность нагалазы в сыворотке крови всегда была на низком уровне.
Отсутствие строгой обратной зависимости между активностью нагалазы в сыворотке крови и клинической реакцией было недавно отмечено в исследовании, описывающем действие GcMAF у аутичных детей.
У большинства этих пациентов действительно наблюдалось снижение активности нагалазы в сыворотке крови, а также значительное улучшение симптомов, но эти два явления не были строго коррелированы друг с другом.(18)

Важным моментом, который вытекает из анализа описанных выше случаев описанных выше, является очевидное отсутствие побочных эффектов, связанных с GcMAF. Этот момент, который ранее был задокументирован у аутичных детей, (18) имеет большое значение, когда GcMAF рассматривается для сострадательного лечения пациентов с прогрессирующими или неизлечимыми заболеваниями.
На самом деле, во многих странах полное отсутствие побочных эффектов является обязательным условием для сострадательного применения веществ, которые еще не одобрены местными санитарными органами.

Очевидно, что эти предварительные наблюдения требуют длительного наблюдения для определения наилучших показаний для сострадательного применения GcMAF.
На сегодняшний день GcMAF используется (всегда в качестве сострадательной терапии) с обнадеживающими результатами у пациентов, страдающих практически всеми видами рака и на всех стадиях развития заболевания.
Однако заманчиво предположить, что пациенты с определенными типами и/или стадиями злокачественных опухолей могут получить постоянную клиническую пользу от применения GcMAF.
Кроме того, генетический фон пациентов, в частности, полиморфизмы VDR, могут влиять на индивидуальный ответ на GcMAF.
Так, недавно мы продемонстрировали, что степень ответа человеческих моноцитов на GcMAF связана с индивидуальными генотипами VDR.(13)

Поэтому можно предположить, что антинеопластические эффекты GcMAF также могут зависеть от таких полиморфизмов. Кроме того, следует учитывать, что прогноз для пациентов, страдающих всеми видами рака, зависит от их питания и воспалительного статуса, который можно отслеживать с помощью прогностического индекса воспаления и питания (PINI).(19)

Таким образом, показатель PINI может стать частью лабораторных исследований, проводимых в ходе терапии GcMAF, и — вместе вместе с оценкой активности нагалазы в сыворотке крови и полиморфизмов VDR — это может помочь врачам в мониторинге ответа отдельного пациента на GcMAF и корректировке доз и графиков в процессе лечения, если это необходимо.
Исследования, изучающие влияние полиморфизмов GC на ответ онкологических пациентов на терапию GcMAF, а также вклад различных вариантов GC в относительное количество «неиндуцируемых», неактивных видов GcMAF (20) также будут иметь важное значение для определения наиболее правильного подхода к применению GcMAF.
Представленные здесь результаты согласуются с предыдущими результатами (5-7), а также с недавней публикацией Inuietal. (21), в которой описаны три клинических случая успешного лечения с помощью комбинаторных терапевтических схем, включающих подкожные или внутримышечные инъекции GcMAF-содержащей человеческой сыворотки.
В отличие от последнего исследования, представленные здесь результаты были получены с использованием высокоочищенного GcMAF, что исключает влияние других сывороточных белков, которые могли бы действовать как сбивающие факторы.
В заключение следует отметить, что представленные здесь клинические случаи подтверждают гипотезу о том, что GcMAF может стать частью противораковых иммунотерапевтических схем.

Материалы и методы

Производство GcMAF. Врачи получили GcMAF от Immuno Biotech Ltd (Гернси, Великобритания). GcMAF был высокоочищен в соответствии с ранее описанными процедурами.(7)

Вкратце, VDBP выделяли из очищенной человеческой сыворотки, полученной от Американского Красного Креста, используя либо 25-гидроксивитамин D3-сефарозную высокоаффинную хроматографию, либо актино-агарозную аффинную хроматографию. Связанный материал отсеивался и подвергался дальнейшей обработке путем инкубации с тремя иммобилизованными ферментами. Полученный GcMAF стерилизовали на фильтрах. Содержание белка и концентрацию раствора GcMAF определяли с помощью стандартных методов анализа белка Брэдфорда.(22)

В конце производственного процесса GcMAF был проверен на стерильность как внутри компании, так и за ее пределами, независимыми лабораториями. Безопасность и биологическая активность GcMAF были проверены на моноцитах человека (13), клетках рака молочной железы человека,(10) и хорионаллантоидных мембранах эмбриона цыпленка.(12)

Сбор данных.
Ретроспективный обзор карт для анализа тестирования нагалазы был проведен на первоначальной когорте пациентов, наблюдавшихся врачами (RE и д-р Стивен Хофман, CMC, Капелле-ан-ден-Ийссел, Нидерланды). Все записи были просмотрены врачами для подтверждения значений активности нагалазы в сыворотке крови, диагнозов, временных интервалов между анализами, дозирования GcMAF и клинических реакций. Диагноз рака был подтвержден другими лечащими врачами.

Введение GcMAF.
Назначение GcMAF отдельным пациентам осуществлялось исключительно их врачами (RE и д-р Стивен Хофман, CMC, Capelle aan den Ijssel; Нидерланды) в соответствии с национальными правилами и нормами.

Оригиналы клинических записей сохранены врачами в соответствующих местах, как указано. В разделе «Результаты» клинические случаи представлены как можно ближе к оригиналам записей врачей, с минимальными грамматическими и орфографическими исправлениями.

Поскольку каждый из врачей описывал состояние отдельных пациентов по-своему, следует ожидать некоторой неоднородности в этих записях. Заметки специально представлены в том виде, в котором они были написаны, чтобы каждый читатель мог сделать свои выводы.

Определение активности нагалазы в сыворотке крови. Определение нагалазы в сыворотке крови было проведено в ELN Laboratories (Bunnik, The Нидерланды) в соответствии с процедурой, опубликованной Ямамото и др.(14).

В частности, активность нагалазы в сыворотке определялась с помощью ферментативного анализа с конечной точкой на основе хромогенного субстрата. ELN Laboratories установила референсный диапазон 0,32-0,95 нМ/мин/мг субстрата на основе образцов сыворотки, собранных у здоровых добровольцев, что несколько выше, чем сообщалось ранее и составляло 0,35-0,65 нМ/мин/мг.(14) Дальнейшие исследования на большом количестве испытуемых позволят установить наиболее подходящий референсный диапазон. Независимо от этого вопроса, поскольку все определения проводились в одной лаборатории, относительное снижение активности нагалазы в сыворотке крови после приема GcMAF использовалось в качестве показателя терапевтической эффективности.

Статистические методы.

Статистические сравнения между активностью нагалазы в сыворотке крови до и после (в двух разных временных точках) введения GcMAF, проводилось с помощью t-тестов Стьюдента.

Раскрытие потенциальных конфликтов интересов.
 DN является генеральным директором компании Immuno Biotech Ltd (компания, выделившая и очистившая белок GcMAF).
Тем не менее, DN не знал ни о применяемых методах лечения, ни имен пациентов, чьи данные анализировались.
Ни он, ни кто-либо из сотрудник компании Immuno Biotech Ltd, не имели никакого представления об уровне нагалазы или других результатов анализов или имен пациентов, использованных в данном исследовании.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить д-ра Стивена Хофмана, CMC, Капелль aan den Ijssel, Нидерланды, за предоставление данных, касающихся пациентов, которых он лечил, а также за критический обзор данного исследования.

References
1. Yamamoto N, Naraparaju VR, Moore M, Brent LH.
Deglycosylation of serum vitamin D3-binding protein by alpha-N-acetylgalactosaminidase detected in the plasma of patients with systemic lupus erythematosus. Clin Immunol Immunopathol 1997; 82:290-8; PMID:9073553; http://dx.doi.org/10.1006/clin.1996.4320
2. Mohamad SB, Nagasawa H, Uto Y, Hori H.
Tumor cell alpha-N-acetylgalactosaminidase activity and its involvement in GcMAF-related macrophage activation.
Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol 2002;132:1-8; PMID:12062184; http://dx.doi.org/10.1016/S1095-6433(01)00522-0
3. Greco M, Mitri MD, Chiriacò F, Leo G, Brienza E, Maffia M.
Serum proteomic profile of cutaneous malignant melanoma and relation to cancer progression: association to tumor derived alpha-N-acetylgalactosaminidase activity. Cancer Lett 2009; 283:222-9; PMID:19394758; http://dx.doi.org/10.1016/j.canlet.2009.04.001
4. Reddi AL, Sankaranarayanan K, Arulraj HS, Devaraj N, Devaraj H.
Serum alpha-N-acetylgalactosaminidase is associated with diagnosis/prognosis of patients with squamous cell carcinoma of the uterine cervix.
Cancer Lett 2000; 158:61-4; PMID:10940510; http://dx.doi.org/10.1016/S0304-3835(00)00502-4
5. Yamamoto N, Suyama H, Yamamoto N, Ushijima N.
Immunotherapy of metastatic breast cancer patients with vitamin D-binding protein-derived macrophage activating factor (GcMAF).
Int J Cancer 2008; 122:461-7; PMID:17935130; http://dx.doi.org/10.1002/ijc.23107
6. Yamamoto N, Suyama H, Nakazato H, Yamamoto N, Koga Y.
Immunotherapy of metastatic colorectal cancer with vitamin D-binding protein-derived macrophage-activating factor, GcMAF.
Cancer Immunol Immunother 2008; 57:1007-16; PMID:18058096;
http://dx.doi.org/10.1007/s00262-007-0431-z
7. Yamamoto N, Suyama H, Yamamoto N.
Immunotherapy for Prostate Cancer with Gc ProteinDerived Macrophage-Activating Factor, GcMAF. Transl Oncol 2008; 1:65-72; PMID:18633461
8. Nonaka K, Onizuka S, Ishibashi H, Uto Y, Hori H, Nakayama T, et al.
Vitamin D binding protein-macrophage activating factor inhibits HCC in SCID mice.
J Surg Res 2012; 172:116-22; PMID:20855083;
http://dx.doi.org/10.1016/j.jss.2010.07.057
9. Gregory KJ, Zhao B, Bielenberg DR, Dridi S, Wu J, Jiang W, et al.
Vitamin D binding protein-macrophage activating factor directly inhibits proliferation, migration, and uPAR expression of prostate cancer cells.
PLoS One 2010; 5:e13428; PMID:20976141;
http://dx.doi.org/10.1371/journal.pone.0013428
10. Pacini S, Punzi T, Morucci G, Gulisano M, Ruggiero M.
Effects of vitamin D-binding protein-derived macrophage-activating factor on human breast cancer cells.
Anticancer Res 2012; 32:45-52; PMID:22213287
11. Kalkunte S, Brard L, Granai CO, Swamy N.
Inhibition of angiogenesis by vitamin D-binding protein: characterization of anti-endothelial activity of DBP-maf.
Angiogenesis 2005; 8:349-60; PMID:16400520;
http://dx.doi.org/10.1007/s10456-005-9024-7
12. Pacini S, Morucci G, Punzi T, Gulisano M, Ruggiero M.
Gc protein-derived macrophage-activating factor (GcMAF) stimulates cAMP formation in human mononuclear cells and inhibits angiogenesis in chick embryo chorionallantoic membrane assay.
Cancer Immunol Immunother 2011; 60:479-85; PMID:21170647;
http://dx.doi.org/10.1007/s00262-010-0953-7
13. Pacini S, Morucci G, Punzi T, Gulisano M, Ruggiero M, Amato M, et al.
Effect of paricalcitol and GcMAF on angiogenesis and human peripheral blood mononuclear cell proliferation and signaling.
J Nephrol 2012; 25:577-81; PMID:21956771;
http://dx.doi.org/10.5301/jn.5000035
14. Yamamoto N, Naraparaju VR, Urade M.
Prognostic utility of serum alpha-N-acetylgalactosaminidase and
immunosuppression resulted from deglycosylation of serum Gc protein in oral cancer patients.
Cancer Res 1997; 57:295-9; PMID:9000571
15. Yamamoto N, Lindsay DD, Naraparaju VR, Ireland
RA, Popoff SN.
A defect in the inflammation-primed macrophage-activation cascade in osteopetrotic rats.
J Immunol 1994; 152:5100-7; PMID:8176226
16. Nunn R. Mere anecdote: evidence and stories in medicine.
J Eval Clin Pract 2011; 17:920-6; PMID:21815971;
http://dx.doi.org/10.1111/j.1365-2753.2011.01727.x
17. Yamamoto N, Ushijima N, Koga Y.
Immunotherapy of HIV-infected patients with Gc protein-derived macrophage activating factor (GcMAF).
J Med Virol 2009; 81:16-26; PMID:19031451;
http://dx.doi.org/10.1002/jmv.21376
18. Bradstreet JJ, Vogelaar E, Thyer L.
Initial observations of elevated alpha-N-acetylgalactosaminidase activity associated with autism and observed reductions from GC protein-macrophage activating factor injections.
Autism Insights 2012; 4:31-8;
http://dx.doi.org/10.4137/AUI.S10485
19. Fabris A, Biagioni P, Punzi T, Morucci G, Gulisano M, Pacini S, et al.
Role of angiotensin-converting enzyme and vitamin D receptor gene polymorphisms in cancer anorexia-cachexia syndrome.
Am J Immunol 2012; 8:65-70
20. Rehder DS, Nelson RW, Borges CR.
Glycosylation status of vitamin D binding protein in cancer patients.
Protein Sci 2009; 18:2036-42; PMID:19642159;
http://dx.doi.org/10.1002/pro.214
21. Inui T, Kuchiike D, Kubo K, Mette M, Uto Y, Hori H, et al.
Clinical Experience of Integrative Cancer Immunotherapy with GcMAF.
Anticancer Res 2013; 33:2917-9; PMID:23780980
22. Bradford MM.
A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding.
Anal Biochem 1976; 72:248-54; PMID:942051;
http://dx.doi.org/10.1016/0003-2697(76)90527-3

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *